在HPLC分析過程中,由于各種原因,經(jīng)常會出現(xiàn)一些異常峰形,嚴(yán)重影響分析結(jié)果,給實驗者帶來很大的困擾。在這里介紹了一些常見的峰形狀和可能的原因,我們將了解它們是否與HPLC柱有關(guān)。
1、無峰值
可能的原因:
a、進(jìn)樣不成功,或樣品未溶解在溶劑中,或樣品分解變質(zhì)或樣品濃度過低;
b、液相色譜儀本身的問題:泵或檢測器故障;
C、流動相選擇不當(dāng)。比如反相硅膠柱,如果流動相極性太大,一些小的極性物質(zhì)就洗不掉,這些物質(zhì)殘留在柱子里,就不會出峰;
d、探測器不合適。例如,有些產(chǎn)品沒有紫外線吸收或吸收很弱,但使用紫外線檢測器進(jìn)行檢測。
2、平頭峰
可能的原因:
a、樣品濃度過大或進(jìn)樣量過大,也是主要原因;
b、液相色譜的檢測器設(shè)置不正確。
3、負(fù)峰
可能的原因:
a、流動相吸收背景值過高;
b、采樣過程中有空氣進(jìn)入;
C、樣品組分的吸收低于流動相的吸收;
d、所制備樣品的溶劑與流動相不一致。
4、肩峰
可能的原因:
a、進(jìn)樣量過大,樣品濃度過高;
b、保護(hù)柱或柱頭堵塞;
C、保護(hù)柱或色譜柱被污染或失效;
d、柱頭塌陷。
5、分叉峰
可能的原因:
a、溶劑效應(yīng):用于溶解樣品的溶劑與初始流動相的極性相差太大;
b、保護(hù)柱或柱頭堵塞;
C、保護(hù)柱或色譜柱被污染或失效;
d、柱頭塌陷。
6.鬼峰
可能的原因: 鬼峰出現(xiàn)在某個光譜中,做同樣的條件后可能不會再出現(xiàn)。有時沒有峰值。
a、對于進(jìn)樣閥的殘留峰,每次進(jìn)樣后要花足夠的時間平衡和清潔系統(tǒng);
b、樣品中存在未知物,改善樣品的前處理;
C、如果流動相被污染,更換新的流動相(或更換品牌);盡量準(zhǔn)備現(xiàn)用,再次使用時過濾過夜流動相;
d、流道內(nèi)有小氣泡,打開吹掃閥增加流量消除。
7、凸峰
可能的原因:
a、進(jìn)樣量或樣品濃度高;
b、溶解樣品的溶劑比流動相極性更大;
C、保護(hù)柱或色譜柱被污染或失效;
d、如果流動相不合適,更換新的(調(diào)整pH值或改變類型、比例等)。
8、拖尾峰
可能的原因:
a、進(jìn)樣量或樣品濃度高;
b、如果流動相不合適,更換新的(調(diào)整pH值或改變類型、比例等);
C、硅烷醇作用:加入三乙胺,用堿誘導(dǎo)鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度,降低流動相的pH值,鈍化樣品;
d、柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效:更換燒結(jié)不銹鋼,增加在線過濾器,過濾樣品;
e、柱頭塌陷或柱效降低:更換色譜柱。