【臨床醫(yī)師和流行病學(xué)家希望能在出生前幾個月里就確定嬰兒是否感染了寨卡病毒,為此美國**控制與預(yù)防中心CDC的科學(xué)家們進行了一種稱為蝕斑減少中和試驗(Plaque Reduction Neutralization Test) 的檢測,這種方法是檢測血清中和抗體的一種敏感性較高的方法,能檢測之前的感染。】
2014年以來美洲多個國家相繼發(fā)生寨卡病毒(Zika)感染病例,世界衛(wèi)生組織近日警告,寨卡病毒正呈現(xiàn)“暴發(fā)式傳播”,預(yù)計美洲地區(qū)將有至多400萬人感染這種病毒。截至目前,中國大陸尚未發(fā)現(xiàn)病例,但**預(yù)防控制中心指出我國仍存在病例輸入風險。
目前關(guān)于這種病毒傳播的疑問不少,比如懷孕期間感染與造成嬰兒小頭畸形之間的關(guān)聯(lián),但由于目前診斷方法的局限性,還很難給出一個答案來。一組研究人員正在攻關(guān),希望能以*快的速度研發(fā)出**試劑,檢測是否感染Zika病毒。
來自德州大學(xué)加爾維斯頓醫(yī)學(xué)分校的Nikos Vasilakis表示,“我們正盡全力盡快給臨床醫(yī)師們一些答案?!?/span>
目前,檢測寨卡病毒的標準檢測方法是對樣本進行PCR,分析樣本中的病毒RNA探針是否存在,雖然這種方法能很好的檢測到病毒,但是病原體的RNA很快就會被降解掉。“在患者把樣品送入臨床時,病毒也許已經(jīng)消失,或者只能抓住它的尾巴了,這超過了檢測時間限制,”Vasilakis說。
臨床醫(yī)師和流行病學(xué)家希望能在出生前幾個月里就確定嬰兒是否感染了寨卡病毒,為此美國**控制與預(yù)防中心CDC的科學(xué)家們進行了一種稱為蝕斑減少中和試驗(Plaque Reduction Neutralization Test) 的檢測,這種方法是檢測血清中和抗體的一種敏感性較高的方法,能檢測之前的感染。
從原理上說,這一檢測方法以使蝕斑數(shù)減少50%的血清稀釋度作為其中的效價。試驗使用定量的病毒(100PFU)與不同稀釋度的等量血清混合后感作, 接種預(yù)先準備好的單層細胞,再覆蓋上營養(yǎng)瓊脂置37度二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng),數(shù)天后分別統(tǒng)計蝕斑數(shù),用Karber法計算該血清的蝕斑中和效價。
患者的血清中混有病毒,幾天時間里研究人員觀察病毒是否會感染培養(yǎng)基,如果沒有,那么病毒就已經(jīng)被血清中的抗體中和了,這表明患者曾經(jīng)接觸過寨卡病毒。
CDC甲類病毒實驗室主任Ann Powers表示,使用這種方法的問題在于“你必須有活體病毒,和合適**的環(huán)境,”這意味著只有少數(shù)幾個實驗室能進行這種試驗。
其它更加方便的血清學(xué)測試也能檢測特定病原體中的抗體,但是對于寨卡病毒來說,很難判斷患者攜帶的黃病毒是登革熱病毒,寨卡病毒還是其它病毒?!岸艺ú《境鋈サ膮^(qū)域也正是登革熱出現(xiàn)的地區(qū),”來自華盛頓大學(xué)圣路易斯分校的**學(xué)家Mike Diamond說。
Vasilakis 正在嘗試ELISA方法,也就是檢測體液中微量物質(zhì)的固相**測定的方法,這種方法利用抗原與抗體的特異反應(yīng)將待測物與酶連接,然后通過酶與底物產(chǎn)生顏色反應(yīng),用于定量測定,可以在感染后幾個星期內(nèi)檢測到Zika病毒。雖然這也有可能會與其它感染發(fā)生一定程度的交叉反應(yīng),但如果Zika病毒特異性抗體濃度高就能指示出近期發(fā)生的Zika病毒感染,Vasilakis說。
Vasilakis預(yù)計在未來幾周內(nèi),Diamond研究組就會有結(jié)果,研發(fā)出一種針對Zika病毒的單克隆抗體檢測方法,這能與ELISA方法結(jié)合,檢測發(fā)生過的感染,“我們很早就開展了這項研究,這個月就能得到結(jié)果,”Diamond說,“初步結(jié)果表明我們的一些抗體能特異性識別Zika病毒?!?/span>
不過即使Diamond研究組的抗體能特異性檢測Zika病毒,他們也需要一些時間來建立診斷方法,“這可能還需要幾個月的時間?!?/span>
與此同時,一些生物公司也開始銷售Zika血清學(xué)檢測,比如MyBioSource 公司已經(jīng)有售一種針對Zika的IgM ELISA檢測,來自加拿大的Biocan 公司也在出售一種檢測IgM和IgG抗體(后者比前者在感染后提升水平更高)的扎手指檢測方法,能在5到10分鐘得到結(jié)果。
Diamond表示他們還未接觸任何商業(yè)產(chǎn)品,Biocan目前還未給出有效數(shù)據(jù),但是其銷售部總經(jīng)理Bhavjit Jauhar表示他們已經(jīng)將實驗室和現(xiàn)場檢測結(jié)果呈遞給巴西監(jiān)管當局,“我們過去幾年間一直致力于Zika病毒的研究,因為我們認為這種疫情會暴發(fā)?!?/span>
來源:儀器信息網(wǎng)