液相色譜理論發(fā)展簡(jiǎn)介

色譜的分離原理是：當(dāng)溶解在流動(dòng)相中的組分通過(guò)固定相時(shí)，它們會(huì)與固定相發(fā)生相互作用（吸附、分布、離子吸引、排斥、親和）。大小和強(qiáng)度不同，在固定相中的停留時(shí)間也不同，所以從固定相中陸續(xù)流出。也稱為色譜和斷層掃描。

1906 年，俄羅斯植物學(xué)家 Tswett 在研究植物色素與碳酸鈣的分離時(shí)，首先發(fā)現(xiàn)了色譜法。色譜法以它命名。后來(lái)在此基礎(chǔ)上又發(fā)展了紙色譜、薄層色譜、氣相色譜和液相色譜。

液相色譜的初始階段是使用大口徑玻璃柱在常溫常壓下以液位差輸送流動(dòng)相。這種方法稱為經(jīng)典液相色譜法。這種方法柱效低，時(shí)間長(zhǎng)（往往幾個(gè)小時(shí)）。高效液相色譜（High performance Liquid Chromatography，HPLC）是在經(jīng)典液相色譜的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的，在1960年代后期，氣相色譜理論被引入并得到迅速發(fā)展。它與經(jīng)典液相色譜的區(qū)別在于填料顆粒小而均勻。小顆粒具有高柱效但會(huì)產(chǎn)生高阻力。輸送流動(dòng)相需要高壓，故又稱高壓液相色譜（HPLC）。由于分析速度快，它也被稱為高速液相色譜（HSLP）。也稱為現(xiàn)代液相色譜。

HPLC液相色譜柱采用特殊的鍵合工藝，雙重密封，鍵合密度高，碳含量高，疏水性高（低極性），適用于各種非極性化合物的分析，在酸或堿中均有良好的分離效果在流動(dòng)相下。

HPLC液相色譜柱尺寸選擇

色譜柱越長(zhǎng)，組分保留越強(qiáng)，運(yùn)行時(shí)間越長(zhǎng)，柱效越高，分離效果越好。在實(shí)際工作中，要綜合測(cè)量運(yùn)行時(shí)間和柱效，選擇合適長(zhǎng)度的色譜柱。例如，含量測(cè)定和溶出度測(cè)試對(duì)分離的要求較低。可以使用較短的色譜柱以減少運(yùn)行時(shí)間；對(duì)于有關(guān)物質(zhì)，一般選擇較長(zhǎng)的色譜柱，以提高分離效果。

小內(nèi)徑色譜柱靈敏度更高，峰形更窄，但上樣量更小。如果上樣量滿足要求，則需要更高更尖的峰以提高靈敏度，可選擇更小的內(nèi)徑。但是，如果進(jìn)樣量超過(guò)色譜柱裝載量，色譜峰將大大展寬。因此，應(yīng)在靈敏度和上樣量之間進(jìn)行綜合衡量。

色譜柱粒徑如何影響色譜分離？

小粒徑色譜柱具有更好的分離度和更高的色譜柱壓力。如果 5μm 色譜柱的分離度稍顯不足，則相同型號(hào)的 3μm 色譜柱的分離度通常會(huì)提供令人滿意的選擇性。

如果您選擇較小尺寸的色譜柱，您應(yīng)該測(cè)量柱外死體積對(duì)柱效的影響。柱外死體積包括連接管路、進(jìn)樣體積以及色譜柱接頭與色譜柱接頭之間的間隙。因此，一般超高效液相使用的色譜柱不適用于常規(guī)液相儀器。小尺寸色譜柱使用同品牌儀器，以減少連接處間隙引入的死體積。Hawach提供3μm、5μm粒徑的HPLC柱，如CN HPLC柱、NH2 HPLC柱和SCX HPLC柱。