使用島津HPLC法測(cè)定奶粉及奶制品中三聚氰胺的殘留
1、試劑
1.1 甲醇：色譜純。
1.2 乙腈：色譜純。
1.3 氨水：濃度25%-28%
1.4 混合性陽(yáng)離子交換固相萃取柱：60mg，3mL。
1.5 三***溶液10g/L：稱(chēng)取10g三***加水至1000mL。
1.6 氨水甲醇溶液：量取5mL氨水，溶解于100mL甲醇中。
1.7 乙酸鉛溶液22g/L：取22g乙酸鉛用約300mL水溶解后定容至1L。
1.8 濾膜：0.45um，有機(jī)相。
1.9 甲醇溶液：200mL甲醇（1.1）加入800mL**水，混勻。
1.10 流動(dòng)相：稱(chēng)取2.02g庚烷磺酸鈉和2.10g檸檬酸于1L容量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度。取該溶液900mL加入100mL乙腈（1.2）。
1.11三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品（純度＞99%）。
1.12 三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液
1.12.1 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：稱(chēng)取100mg（**到0.1mg）的三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶液（1.9）溶解并定容于100mL容量瓶中，該溶液濃度為1mg/mL，于4℃冰箱內(nèi)貯存，有效期3個(gè)月。
1.12.2 標(biāo)準(zhǔn)中間液：吸取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液5.00mL，于50mL容量瓶?jī)?nèi)，用甲醇溶液（1.9）定容至50mL，該溶液三聚氰胺濃度為100ug/mL，于4℃冰箱內(nèi)貯存，有效期1個(gè)月。
1.12.3 標(biāo)準(zhǔn)工作液：用移液管分別移取標(biāo)準(zhǔn)中間液1mL、5mL、10mL、25mL、50mL于5個(gè)100mL容量瓶?jī)?nèi)，用甲醇溶液（1.9）定容，該溶液三聚氰胺濃度為1.0ug/mL、5.0ug/mL、10ug/mL、25ug/mL、50ug/mL。于4℃冰箱內(nèi)貯存，有效期1周。
2、儀器設(shè)備
高速離心機(jī)（轉(zhuǎn)速可達(dá)到10000r/min以上）
漩渦混合器
超聲波清洗器
氮吹儀(控溫可達(dá)到60℃以上)
固相萃取裝置及混合型陽(yáng)離子交換固相萃取柱（與農(nóng)業(yè)部行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)有改動(dòng)，省略）
3、測(cè)定步驟
3.1 提取
奶粉樣品取樣5g、液態(tài)奶制品20g（**至0.01g），準(zhǔn)確加入50mL三***溶液（1.5），加入乙酸鉛溶液（1.7）。搖勻，超聲提取20min。靜置2min，取上層提取液約30mL轉(zhuǎn)入離心管，在10000r/min離心機(jī)上離心5min。
3.2 凈化（與農(nóng)業(yè)部行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)有改動(dòng)，省略此步，只是將3.1離心后上清液過(guò)0.2um膜后進(jìn)樣）
分別用3mL甲醇，3mL水活化混合型陽(yáng)離子交換固相萃取柱，準(zhǔn)確移取10mL離心液分次上柱，控制過(guò)柱速度在1mL/min以?xún)?nèi)。再用3mL水和3mL甲醇洗滌混合型陽(yáng)離子交換固相萃取柱，抽近干后用氨水甲醇溶液（1.6）3mL洗脫。洗脫液50℃氮?dú)獯蹈桑瑴?zhǔn)確加入甲醇溶液（1.9），漩渦振蕩1min，過(guò)0.45um濾膜，上機(jī)測(cè)定。
儀器設(shè)備：
1. 恒流泵(LC-20AT、LC-10AvpPLUS)
2. 進(jìn)樣系統(tǒng)：手動(dòng)、
3. 檢測(cè)器：SPD-20A、LC-10AvpPULS紫外-可見(jiàn)
4. 色譜柱：CAPCELL PAK CR
5. 柱 箱：AT330
分析條件：
色譜柱：CAPCELL PAK CR液相色譜柱（SHISEIDO公司），4.6mmID×150mm
流動(dòng)相：10mmol/L醋酸胺水溶液：乙腈（pH=3）=50：50
流動(dòng)相流速：1.500mL/min
柱 溫：30℃（室溫）
檢測(cè)波長(zhǎng)：243nm （與農(nóng)業(yè)部行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)有改動(dòng)）
譜圖：
此檢測(cè)方法需保持pH值在3.0一致，稍有偏離就會(huì)導(dǎo)致保留時(shí)間偏移。
檢測(cè)限：農(nóng)業(yè)部飼料中三聚氰胺NYT 1372-2007的測(cè)定行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) 規(guī)定為2.0ppm。
北京市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局 實(shí)測(cè)為1.0ppm以下。
