一、試劑配制

磷酸鹽緩沖液Ⅰ：

稱取7.1 g磷酸氫二鈉、58.4 g氯化鈉，加900 mL水溶解，用磷酸調pH至8.0±0.2，加水定容至1000 mL，臨用現(xiàn)配。

磷酸鹽緩沖液Ⅱ：

稱取28.4 g磷酸氫二鈉，加900 mL水溶解，用磷酸調節(jié)pH至7.5±0.2，加水定容至1000 mL，臨用現(xiàn)配。

0.1%三氟乙酸溶液：

量取1 mL三氟乙酸注入900 mL水中，用水稀釋至1000 mL，過0.45 μm濾膜。

二、樣品處理

牛乳鐵蛋白標準儲備溶液(5.0mg/mL)：

稱取50mg(精 確至0.1mg)牛乳鐵蛋白標準品用水溶解,轉移至10mL容量瓶并定容至刻度,混勻,0℃~4℃條件下保存,可保存3個月。

三、操作程序

活化：

取出Lubex肝素免 疫親和柱， 肝素親和柱先用5mL磷酸緩沖液Ⅱ活化，準確移取10ml上清液過柱；

用10ml磷酸緩沖液Ⅱ淋洗，棄去流出液，用5mL磷酸緩沖液Ⅰ洗脫，收集洗脫液并用磷酸緩沖液Ⅰ定容至5mL，渦旋混勻，過0.45μm水相針式濾器后待測。

四、操作條件

1)色譜柱: ECOSIL C4 5μm 250mm×4.6mm 300?  

2)檢測波長: 280nm

3)柱溫: 30℃

4)進樣體積: 50μL

5)流速: 1.0mL/min

6)流動相: 0.1%三氟乙酸溶液和乙腈,梯度洗脫參數(shù)見表1。

五、柱容量驗證圖譜

圖一 肝素親和柱1譜圖

圖二 肝素親和柱2譜圖

六、柱容量驗證數(shù)據(jù)

表2  柱容量驗證數(shù)據(jù)

七、實驗結論

本文按照國標方法驗證了Lubex肝素親和柱的柱容量，回收率均＞95%，滿足國標對于柱容量的要求。